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免疫組織化學染色中全自動染色機的運用實踐
發布時間:2020-06-01

  摘    要: 目的 觀察全自動染色機在免疫組織化學染色中的應用。方法 選取2018年12月該院所開出的免疫組化項目500項,隨機分為觀察組與對照組,各250項。觀察組將免疫組化中的部分流程在全自動染色機上操作,對照組全手動染色。結果 觀察組所用的人力工作時間和步驟完成時間分別為10分鐘、225分鐘,都明顯低于手工操作對照組的80分鐘、510分鐘。部分流程在全自動染色機上操作的免疫組化結果穩定,定位準確,與手工染色相比,結果相似。結論 在病理科已有全自動染色機而沒有免疫組化儀的條件下,可使用全自動染色機代替手工免疫組化染色中的大部分流程,從而提高免疫組化制片效率,節省人力。

  關鍵詞: 全自動染色機; 免疫組織化學染色; 應用;

  全自動染色機主要用于常規HE染色,染色質量穩定、省時省力。目前全自動免疫組化儀由于制片成本高,好多中小型醫院仍采用手工染色,其應用遠遠不如全自動染色機普遍,筆者采用全自動染色機代替手工免疫組化染色中的大部分流程,大大提高了免疫組化的染色效率,現將方法介紹如下:

  1 、材料與方法

  1.1、 資料與分組

  選取2 0 1 8年1 2月我院所開出的免疫組化項目500項,隨機分為觀察組與對照組,各250項。

  1.2 、方法

  觀察組采用日本櫻花全自動染色封片一體機(prisma-plus+film)替代部分手工染色,將已制備的組織石蠟切片,置入65℃烤箱烤2小時,取出將組織切片按順序擺放,放入全自動染色機配套的切片架上,再次置入6 5℃烤箱,5分鐘后,放入全自動染色機上處理(一次可放入6 0張切片),編輯程序為“免疫組化前處理”,切片依次放入以下試劑中:(1)二甲苯5分鐘,(2)二甲苯5分鐘,(3)二甲苯5分鐘,(4)無水乙醇2分鐘,(5)95%乙醇2分鐘,(6)75%乙醇2分鐘,(7)流水沖洗2分鐘,(8)取出切片。注意此程序不要與封片機相連。待程序結束后取出切片,置入1.5%甲醇過氧化氫(3%過氧化氫︰甲醇為1︰1)室溫阻斷8分鐘,取出切片自來水下沖洗干凈,置入盛有已沸騰的p H6.0的檸檬酸抗原修復液中進行高壓冒氣修復2.5分鐘,后室溫冷卻,自來水沖洗干凈,置入蒸餾水1道清洗2分鐘,磷酸緩沖鹽溶液(PBS)3道各清洗2分鐘,取出切片用免疫組織化學油筆將組織圈起來,圈距組織2mm左右,組織滴加正常非免疫山羊血清(即用型)室溫孵育5分鐘,將血清傾去,用紙巾將組織切片上多余的血清擦去,滴加對應的一抗試劑(即用型),4℃冰箱過夜;次日早,取出切片,室溫放置10分鐘復溫,用自來水沖洗切片,置入蒸餾水1道清洗2分鐘,PBS 3道各清洗2分鐘,將切片置于濕盒中,滴加抗兔/鼠通用型二抗,室溫孵育30分鐘,取出切片置于切片架上,自來水沖洗干凈后入蒸餾水1道清洗2分鐘,PBS 3道各清洗2分鐘,配制DAB顯色液(底物緩沖液:顯色液為50︰1)進行DAB顯色,顯色時間3~5分鐘,通過顯微鏡觀察顯色進程,顯色完成,自來水終止反應,將切片置入切片架上,自來水沖洗干凈,將多余水分甩干,將切片架置入全自動染色機中,編輯程序為“免疫組化后處理”,切片依次放入以下試劑中:(1)蘇木素5分鐘,(2)流水沖洗2分鐘,(3)0.1%鹽酸酒精1/6分鐘,(4)流水沖洗2分鐘,(5)95%乙醇2分鐘,(6)無水乙醇2分鐘,(7)無水乙醇2分鐘,(8)二甲苯2分鐘,(9)二甲苯2分鐘,(10)封片。此程序注意要與封片機相連。染色完成,查對無誤,交于診斷醫生。對照組采用手工染色,方法如下:一次可處理36張切片(是由本科室的切片架和染色缸的規格決定),染色流程同上,在全自動染色機的程序免疫組化前處理和免疫組化后處理程序全部換成手工操作即可。
 

免疫組織化學染色中全自動染色機的運用實踐
 

  1.3 、觀察指標

  記錄并比較兩組機器替代手工操作所用的流程人力工作時間和步驟完成所需時間,其余步驟兩者相同,無須比較。

  2、 結果

  2.1、 兩組免疫組化染色效率比較

  觀察組所用的人力工作時間和步驟完成時間分別為10分鐘、225分鐘,明顯低于對照組的80分鐘、510分鐘。

  2.2 、兩組染色結果比較

  部分流程在全自動染色機上操作的免疫組化結果穩定,定位準確,與手工染色相比,結果相似,見圖1-4。

  圖1 免疫組化部分流程機器染色KI-67核表達
圖1 免疫組化部分流程機器染色KI-67核表達

  圖2 免疫組化部分流程機器染色P120膜表達
圖2 免疫組化部分流程機器染色P120膜表達

  圖3 免疫組化手工染色K I-67核表達
圖3 免疫組化手工染色K I-67核表達

  圖4 免疫組化手工染色P 12 0膜表達
圖4 免疫組化手工染色P 12 0膜表達

  3 、討論

  本科室利用全自動染色機處理免疫組織化學染色中與HE常規相同的步驟,使得免疫組織化學染色制片節約了大量的時間和人力,機器操作一次可處理60張切片,而手工只能處理36張切片,目前醫院手工染色所用的切片架最多可放置36張,遠遠比不上機器的處理片數,再者機器操作過程中,工作人員無須過問,可以做其他工作且機器不容易出錯,而手工染色,工作人員要一直操作且易發生人為錯誤,最重要的是染色機的應用也可以保障免疫組織化學染色結果的穩定可靠,目前全自動染色機已廣泛應用于常規HE染色項目且染色質量穩定,省時省力[1];也有部分單位將全自動染色機應用于特殊染色項目上,也收到了較滿意的效果[2],但需注意的是全自動染色機的試劑管理一定要嚴格,我科室采用切片數管理儀器,每500張切片更換染色機中所有試劑。全自動染色機在免疫組織化學染色中的應用探索,可為已配有全自動染色機的病理科室或研究機構提高手工免疫組織染色效率的有效方法。

  參考文獻

  [1]張鵬,包磊,任麗芳,等.全自動染色機與手工染色的比較及其染色程序的改進[J].臨床與實驗病理學雜志,2015,31(2):224.
  [2]張雨婷,張子劍,袁悅瑩,等.全自動染色機在PAS染色中的改良應用[J].診斷病理學雜志,2017,24(2):146.

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